Preparation and application of ELISA for detecting human soluble antigen CD28 in sera

目的 研制灵敏、特异和稳定的可溶性人细胞分化抗原28(sCD28)酶联检测试剂盒,并探讨其临床应用意义.方法取识别不同抗原位点的单抗8G8和2D5分别作为包被单抗和检测单抗,建立双单抗夹心sCD28酶联免疫检测法(sCD28-ELISA),并绘制标准工作曲线.同时,测定36名健康人、23例系统性红斑狼疮(SLE)、38例类风湿性关节炎(RA)和62例Grave病患者血清中sCD28含量.结果研制的sCD28试剂盒最低检测下限为0.3 ng/ml,具有良好线性关系的检测范围是0.5～16.0 ng/ml;8G8单抗包被测定板后置4℃冰箱保存180 d,加入可溶性CD28-Ig重组蛋白的回收率在93%～109%之间.SLE、RA和Grave病患者血清中sCD28含量分别为0.9～7.3 ng/ml、 0.3～6.8 ng/ml、0.2～3.5 ng/ml,明显高于健康人(0～1.1 ng/ml,P＜0.01).结论自制的sCD28试剂盒,能准确测定样本中sCD28含量,可为sCD28分子基础研究和临床疾病辅助诊断、疗效评估及预后判断提供有价值的生物学参数,具有良好应用前景。