Humanisierung und funktionelle Charakterisierung eines gegen Herpes Simplex Viren Typ-1 und Typ-2 (HSV-1 und HSV-2) gerichteten murinen monoklonalen Antikörpers

Herpes Simplex Viren sind weltweit verbreitet und gehoren zu den haufigsten viralen Infektionserregern. Reaktivierungen dieser lebenslang im Wirtsorganismus persistierenden Viren sind insbesondere bei Patienten mit einer schweren Immunsuppression mit lebensbedrohlichen Komplikationen assoziiert. Der dadurch notwendige haufige und langandauernde Einsatz etablierter Virustatika fuhrt zu einer zunehmenden Ausbildung resistenter Virusstamme, die eine rasch fortschreitende, generalisierte Infektion mit todlichem Verlauf zur Folge haben konnen. Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurde der gegenuber HSV-1 und HSV-2 hochwirksame murine monoklonale Antikorper mAk 2c fur eine spatere Anwendung beim Menschen praklinisch evaluiert. Die Untersuchungen der funktionellen Eigenschaften der Antikorperfragmente 2c-F(ab´)2, 2c-Fab und 2c-scFv im direkten Vergleich zum parentalen mAk 2c zeigten, dass die Antikorpervalenz fur die antivirale Wirksamkeit des Antikorpers von entscheidender Bedeutung war. Die bivalenten Antikorper mAk 2c und 2c-F(ab´)2 zeichneten sich im Gegensatz zu den monovalenten Antikorper-Fragmenten 2c-Fab und 2c-scFv durch eine extrem effiziente Virusneutralisation aus und konnten den „cell-to-cell spread“ wirksam inhibieren. Im Gegensatz zur Maus werden beim Mensch Antikorper mit dieser Spezifitat nicht gebildet. Da murine Antikorper fur den Menschen immunogen sind, wurde die Immunogenitat des mAk 2c durch Humanisierung nahezu vollstandig eliminiert. Die funktionellen Eigenschaften des parentalen mAk 2c konnten dabei vollstandig erhalten werden. Bereits die durch alleiniges CDR-Grafting generierte humanisierte Variante mAk hu2c V1 wies eine zum mAk 2c vergleichbare Affinitat auf und war zur gleichermasen effizienten Virusneutralisation sowie Inhibition des „cell-to-cell spreads“ in der Lage. Daruberhinaus konnte die antivirale Wirksamkeit des mAk hu2c V1 an einem breiten Kollektiv von klinischen HSV-1/HSV-2 Isolaten ohne oder mit nachgewiesener Virustatika-Resistenz sowie Laborstammen demonstriert werden. Samtliche der untersuchten Isolate wurden durch den humanisierten Antikorper mit derselben Effektivitat neutralisiert wie die Laborstamme des entsprechenden Typs. Die Untersuchung des Neutralisationspotentials des mAk hu2c V1 im NOD/SCID-Mausmodell zeigte erstmals, dass die alleinige Antikorpergabe ohne zusatzliche Aktivierung von Immun-Effektorfunktionen einen wirksamen Schutz vor einer sonst todlich verlaufenden Infektion vermittelt. Abschliesend wurde die Fahigkeit des mAk hu2c V1 zur Neutralisation des gegenuber etablierten Virustatika multiresistenten Isolates HSV-1 R10.2 im Tiermodell untersucht. Die Gabe des humanisierten Antikorpers im Zuge einer postexpositionellen Immunprophylaxe fuhrte im Gegensatz zur Behandlung mit Aciclovir zu einer wirksamen Eliminierung der Infektion und zum vollstandigen Schutz der immunsupprimierten Versuchstiere vor einem letalen Infektionsverlauf. Die im Rahmen dieser Arbeit erfolgreich durchgefuhrte Humanisierung des anti-HSV-Antikorpers stellt eine vielversprechende Grundlage fur die klinische Weiterentwicklung dieses Antikorpers als eine auserst wirksame Virustatikum-Alternative zur Prophylaxe und Therapie von Herpes Simplex Infektionen dar.