RNA干扰 p 38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用

2016 
目的探讨RNA干扰 p 38基因对人肾癌细胞株786-O增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响。 方法构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组。应用RT-PCR技术检测786-O细胞 p 38 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达。CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。 结果RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-O细胞p38 mRNA及蛋白的表达均降低。与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后3~5 d时的增殖率均降低( P P 50 值均低于阴性对照组[(3.2±0.3)、(1.4±0.1)μmol/mL vs(5.4±0.2)μmol/mL, P 1 期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G 0 /G 1 阻滞。转染24 h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组(76.27±5.08)相比,两组细胞的侵袭能力均下降( P < 0. 01)。 结论通过转染 p 38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的 p 38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础。
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