[Characterization of gene expression associated with both the AcrAB/TolC system and the membrane permeability, in Salmonella spp isolates with and without gyrA mutation].

espanolIntroduccion. Se han estudiado los genes marA, soxS, ramA, acrB y ompF para caracterizar los mecanismos del sistema de expulsion activa AcrAB/TolC y las alteraciones en la permeabilidad de membrana que reducen la sensibilidad a fluoroquinolonas en Salmonella spp. Metodos. Se detectaron las mutaciones en los genes marA, soxS, ramA, acrB y ompF y se cuantifico su nivel de expresion en presencia y ausencia de ciprofloxacino calculando su valor de nivel de cambio por qPCR. Los datos se analizaron estadisticamente mediante el programa SPSS 19.0. Resultados. No se encontraron mutaciones en ninguno de los genes, pero la expresion de los genes reguladores de AcrAB/TolC y del gen estructural acrB se vieron afectados por la presencia de ciprofloxacino tanto en las cepas con mutacion en gyrA como en las cepas silvestres. La activacion del gen marA en presencia del farmaco fue mayor en las cepas silvestres (nivel de cambio de 0,823) que en las mutantes (nivel de cambio de 0,158; p=0,049). Se vio una disminucion de la expresion del gen ompF en presencia de ciprofloxacino en cepas con mutacion (nivel de cambio de -0,949 p=0,017). Conclusion. La disminucion de la sensibilidad a fluoroquinolonas en Salmonella spp es un proceso complejo, donde intervienen diferentes mecanismos bacterianos. Este estudio encuentra gran diferencia en el grado de participacion de los mecanismos estudiados entre las cepas con y sin mutacion en gyrA. Mientras que las cepas silvestres activan el sistema de expulsion activa, especialmente a traves del gen marA, las cepas con mutacion reprimen la expresion del gen ompF, relacionado con las porinas. EnglishIntroduction. The marA, soxS, ramA, acrB and ompF genes have been studied in order to characterize mechanisms of AcrAB-TolC active efflux pumps and membrane permeabilityalterations that reduce fluoroquinolones susceptibility in Salmonella spp. Methods. Mutations in marA, soxS, ramA, acrB and ompF genes were detected, as well as their expression levels in presence and absence of ciprofloxacin, calculating the level of change between them by qPCR. Data were analysed by using SPSS 19.0. Results. No mutations in these genes were found, but both AcrAB-TolC regulatory genes and structural acrB gene expression were affected by ciprofloxacin in both mutant strains and wild type bacterial strains (WT). The activation of the marA gene in presence of drug was higher in WT strains (level of change 0.823) than in mutants strains (level of change 0.158; p=0.049). In gyrA mutants, a reduction in ompF gene expression in presence of ciprofloxacin was found (level of change -0.949 p=0.017). Conclusion. The reduction of fluoroquinolones susceptibility in Salmonella spp is a complex process, in which several different bacterial mechanisms are involved. This study has found a high difference in the degree of participation among studied mechanisms, between bacterial strains with and without gyrA mutation. Whereas WT strains activated efflux pumps especially through marA gene, mutants supressed ompF gene expression related to porins.