日本血吸虫重组质粒pET28α—Sj26GST—Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达

目的构建日本血吸虫重组质粒pET28α－Sj26GST—Sj32，观察该质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达。方法超声粉碎日本血吸虫成虫，提取总RNA，通过RT—PCR扩增获得Sj26GST和Si32抗原编码基因，然后采用基因拼接法剪接Sj26GST和Sj32，得到Sj26GST—Sj32融合基因，克隆至大肠埃希菌原核表达载体pET28α，构建重组质粒pET28α-Sj26GST—Sj32，转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基硫代-β—D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达后用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Western印迹法对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出长度约1991bp的Sj26GST—Sj32融合基因；双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST—Sj32融合基因成功插入pET28α中，SDS—PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约69×10^3的重组蛋白．与预期结果一致，表达的蛋白约占菌体总蛋白的25％；Western印迹法鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET28α—Sj26GST—Sj32，该质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中获得了高效融合表达，表达的融合蛋白具有特异的抗原性。