酿酒葡萄‘桂葡1号’幼叶原生质体分离研究

研究酿酒葡萄‘桂葡1号’幼叶原生质体的最佳分离条件。以‘桂葡1号’20~30日龄无菌苗幼叶为分离原生质体试材,对分离过程中酶液组合、酶解时间、稳定剂浓度、纯化时离心速度及离心时间进行比较分析。酶组合以2%纤维素酶＋0.5%果胶酶为宜。随着酶解时间的延长,原生质体的产量逐渐增高,适合‘桂葡1号’幼叶原生质体的酶解时间以8h为宜。在0.45~0.55 mol/L的甘露醇范围内,随浓度提高,原生质的产率明显上升,0.55 mol/L时达到最大2.48×106个/（g·FW）,活力为79.78%。在悬浮纯化原生质体时,以1000 r/min离心6~8min的效果较好。分离材料的适宜酶液组合为2% Celluasw Onozuka R-10＋0.5% PectolyaseY-23＋25 mmol/L MES＋0.55 mol/L甘露醇,解离时间以8h为宜。悬浮纯化时,蔗糖浓度以30%、1000 r/min离心6~8 min效果较好。