HEM-01 : 유전구형적혈구증 선별검사법들의 비교

배경: Incubation osmotic fragility test (IOFT)는 유전구형적혈구증(hereditary spherocytosis, HS) 진단을 위한 선별 검사 중 하나로 식염수(pH 7.4, 실온) 농도에 따라 적혈구가 용혈되는 정도를 540 nm에서 분광광도계로 측정하는 검사법이다. 유세포 분석기로 측정하는 유전구형적혈구증 선별 검사 중 flow cytometric osmotic fragility test (FOFT)와 eosin-5-maleimide (EMA) binding test가 있다. HS 선별을 위해 시행하는 유세포분석기를 이용한 두 검사법을 기존에 시행하고 있는 IOFT와 결과를 비교해 그 유용성을 살펴보고자 한다. 방법: 2014년 4월부터 2018년 4월까지 본원으로 IOFT가 의뢰된 22건에 대해 FOFT를 같이 시행하였고, 2017년 7월부터 2018년 4월 까지의 6건에 대해서는 EMA binding test도 추가 시행하였다. FOFT는 BD FACSCaliburTM (Becton Dickinson)를 이용하여 적혈구를 생리식염수에 부유시켜 분석기로 수집한 후 중간에 증류수를 튜브에 첨가하여. 적혈구가 용혈된 후 수집된 적혈구 수를 비교하여 계산하였다. EMA binding test는 적혈구를 EMA 염색 후 그 형광을 BD FACSCanto (Becton Dickinson)로 측정하여 정상인 검체 5-6개를 같이 검사 후 그 결과를 비교하였다. 결과: BD FACSCaliburTM (Becton Dickinson)를 이용한 FOFT의 경우 다양한 cutoff에 따라 IOFT와의 일치도가 상이하였다. 6.6% 미만으로는 일치도가 낮았고, % residual red cell (RRC)가 61.9% 미만을 기준으로 하였을 때는 실제 정상인도 양성이 많아 사용하기 힘들었다. % RRC ratio는 검사 시 함께 들어간 정상 검체와 환자 검체의 % RRC 비율로 1.68 이상을 기준으로 할 경우 IOFT와 일치도가 가장 높았다. 22건 중 17건이 일치된 결과를 보여 77.3%의 일치율을 보였다. 불일치한 5건의 경우 중 4건은 FOFT 양성, IOFT 음성이었고, 1건은 FOFT 음성, IOFT 양성이었다. BD FACSCaliburTM (Becton Dickinson)를 이용한 EMA binding test의 경우 환자 검체와 함께 시행했던 정상인 35명의 mean channel fluorescence (MCF)는 13688-16981이였고, 평균 +/-3SD로 계산한 참고구간은 12895-17796이었다. 환자의 MCF와 함께 검사한 정상인의 평균 MCF의 비율이 0.75 미만은 양성, 0.75- 0.80 미만은 borderline으로 간주하였고, borderline까지를 양성으로 간주 시, IOFT와의 일치도는 전체 건수 6건 중에서 5건의 일치된 결과를 보여 83.3% 의 일치율을 보였다. 결론: 유세포분석기 BD FACSCaliburTM를 이용한 FOFT 및 BD FACSCanto를 이용한 EMA binding test 결과를 540 nm에서 측정하는 IOFT와 비교해 보았을 때 상대적으로 높은 일치율을 보여 유전구형적 혈구증 진단을 위한 선별 검사로 유용하다고 사료된다.