靶向程序性死亡因子-1配体的RNA干扰慢病毒载体构建及人胰腺癌稳转细胞株的建立

程序性死亡因子-1配体(PD-L1)是T细胞共刺激分子B-7家族成员,胰腺癌PD-L1表达水平与不良预后有关[1].本研究旨在构建PD-L1的RNA干扰重组慢病毒,并建立稳定低表达PD-L1的胰腺癌Patu8988细胞株.一、材料与方法1.根据PD-L1(NM_014143)序列,合成4条针对PD-L1基因的shRNA序列,单链DNA的正义链按5p向3p顺序依次为:酶切位点(Age Ⅰ)、干扰序列(21 bp)、Loop环(CTCGAG)、干扰序列的反向互补序列(21 bp)、终止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR Ⅰ).将shRNA插入到质粒GV115中,构建4个相应的重组RNA干扰质粒.构建过表达PD-L1的质粒pEGFP-N1-3FLAG-PD-L1。