Effet de ligands de G-quadruplexes sur la séquence terminale des télomères

Les telomeres sont des complexes nucleoproteiques situes a lʼextremite des chromosomes. Le role des telomeres dans la protection du genome, et leur implication dans la senescence et le cancer en font une cible privilegiee dans la lutte contre le cancer. Une strategie originale consiste a bloquer lʼacces de lʼextremite telomerique aux proteines necessaires a sa replication et a sa stabilite comme par exemple la telomerase qui est activee dans 85% des cancers ou les proteines POT1 et TRF2 qui protegent lʼextremite telomerique. A cause de la repetition en guanines du brin G, lʼextremite des telomeres peut former des structures en quadruplexes de guanines (G- quadruplexes) dont la stabilisation par des ligands specifiques (Ligands G4) bloque la replication des telomeres et altere son integrite. Le traitement de cellules tumorales par des ligands G4 provoque une dysfonction telomerique associee a une dissociation des proteines POT1 et TRF2 et conduit a une apoptose ou une senescence des cellules. Lʼanalyse de la sequence terminale de lʼextremite telomerique par la methode STELA (Single Telomere Length Analysis) montre que la sequence terminale du brin C se termine majoritairement par la sequence ATC-5ʼ. La proteine POT1 est responsable de la resection du brin C des telomeres en recrutant une exo- nuclease capable de creer le substrat simple-brin pour la telomerase. La depletion de POT1 par ARN interference provoque une deregulation de la terminaison du brin C. Nous avons etudie au cours de notre travail lʼeffet de ligands G4 sur la sequence terminale du brin C telomerique au niveau des telomeres du chromosome XpYp et au niveau de lʼensemble des telomeres en utilisant une modification de la technique de STELA. Nos resultats montrent quʼune faible concentration des derives de la serie des pyridines dicarboxamides provoque un effet mineur mais significatif au niveau de la sequence terminale des telomeres XpYp et au niveau de lʼensemble des telo- meres dans la lignee HT1080. Au contraire, une concentration plus importante ne modifie pas la sequence terminale du brin C dans les cellules HT1080, A549 et HeLa, mais induit un stress replicatif. Lʼeffet modeste de ces ligands sʼexplique par une activite de dissociation incomplete de la proteine POT1 des telomeres comparativement a sa depletion par ARN interference. En effet, nous avons egalement montre que la depletion quasi complete de POT1 par shARN induit une randomisation de la sequence terminale du brin C.