BSA, Glucose및 Phosphate가 1세포기 생쥐수정란의 체외배양시 2-cell block과 배 발달에 미치는 영향

목적 : 여러 종의 포유류에서 수정란의 체외 배양시 특정 단계에서 발생 정지 (in vitro culture block)현상이 보고되면서, 이러한 현상에 관한 연구는 배양액의 기본 성분인 glucose 및 phosphate, 그리고 BSA의 농도가 배 및 배반포 발달에 영향이 있을 것으로 제기되었으며, 이를 알아보고자 실험을 계획하였다. 연구방법 : 기본 배양액으로 M16을 사용하여, 2-세포기 발달 정지 현상이 나타나는 ICR생쥐 1-세포기 수정난을 채취하여 배양하였다. 수정란의 체외배양은 첫 48시간 동안 다른 농도의 BSA (0-15%)하에서 이루어졌고, 48시간 이후 72시간 동안의 배양은 첫 48시간의 BSA 농도와 같은 농도를 사용한 군과 0.3%로 고정된 BSA를 사용한 군으로 나누어 이루어졌으며 각각 2 cell block의 극복율과 배발달율을 확인하였다. 또한 glucose와 phosphate의 효과를 확인하기 위해 배양액에서 첫 48시간 동안은 제거하였으며 48시간 이후 72시간 동안은 제거한 군과 첨가한 군으로 나누어 실험하였다. 결과 : 1. 1-세포기 생쥐 수정란의 배양시 첫 48시간 동안 BSA 농도가 증가할수록 2 cell block의 극복율이 증가함을 알 수 있었지만, 48시간 이후의 배양액에서는 BSA 농도가 증가하여도 배발달율에는 영향을 미치지 못하였다. 2. 초기 배양액에서 glucose 및 phosphate를 각각 혹은 동시에 제거한 경우 BSA의 농도가 높아질수록 2 cell block의 극복율과 배반포율도 증가하지만 후기 배양액(48시간 이후)에서 glucose와 phosphate의 조성의 변화는 배반포율에 영향을 미치지 못하였다. 또한, 배양액의 BSA 농도가 증가할수록 glucose 및 phosphate를 제거한 후 발생하는 2 cell block의 극복율과 배반포율은 증가하였다. 결론 : 이상의 결과는 1세포기 생쥐 수정란의 체외 배양시 발생하는 2세포기 정지현상의 극복하고 지속적인 배발달을 유지하기 위해 BSA의 농도를 증가시키고, 특히 초기배양에서 glucose 및 phosphate를 제거하는 것이 바람직한 배양 방법으로 생각된다.