重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达

目的：构建重组大鼠△N△C／VEGF-C／Cysl52Ser（ddVEGF—C）逆转录病毒载体，建立稳定表达ddVEGF—C的PT67包装细胞株，并验证其表达。方法：利用PCR从pSecTag—ddVEGF—C中获取大鼠ddVEGF—C基因，克隆到pLPCX逆转录病毒载体，经PCR、双酶切和测序验证，转染PT67包装细胞，嘌呤霉素筛选出稳定表达目的基因的包装细胞株，用反转录PCR（RT-PCR）和Westernblot方法验证其在RAW264．7细胞中的表达。结果：构建的pLPCX—ddVEGF．C逆转录病毒载体经双酶切和PCR鉴定正确，测序结果与ddVEGF-C序列一致，病毒滴度为2×10^7CFU／mL，RT—PCR和Westernblot结果提示重组病毒感染RAW264．7细胞能正确表达ddVEGF-C。结论：成功构建了pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体，并建立了稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株，为以VEGF-C基础的实验研究提供了新工具。