衔接蛋白TAB1/2/3对NF-κB荧光素酶报告基因活性的影响

构建人TAB1、TAB2、TAB3真核表达载体,验证其对NF-κB启动子荧光素酶报告基因活性的影响。提取HeLa细胞总RNA,用RT-PCR方法分别扩增出TAB1、TAB2、TAB3基因编码区全长片段,克隆到5′-HA-pcDNA3.0真核表达载体,并通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将重组载体转染HEK293T细胞,蛋白印迹检测TAB1、TAB2、TAB3的蛋白表达,双素酶报告基因系统检测对NF-κB报告基因的激活作用。结果表明：通过酶切、菌落PCR及测序鉴定,成功构建TAB1、TAB2、TAB3表达载体,该载体可在HEK293T细胞中表达蛋白。经双素酶报告基因系统检测,TAB2、TAB3能显著激活NF-κB报告基因,而TAB1对NF-κB报告基因活化无显著影响。提示,TAB1、TAB2、TAB3对NF-κB报告基因的激活作用存在显著区别。