EFEITO DA QUIMIOTERAPIA EM MODELO DE CULTIVO EM ESFEROIDES

A investigacao pre-clinica do fenotipo do câncer, agressividade e resistencia aos antineoplasicos e geralmente realizada em modelos in vitro de cultura de celulas tumorais em duas dimensoes, conhecido como modelo em monocamada. Porem, esse modelo apresenta limitacoes, como baixa interacao celular com a matriz extracelular e entre celulas com diferentes caracteristicas, alem de poderem nao representar equivalencia de efeito de antineoplasicos com modelos in vivo . Assim, o modelo de cultura em esferoides (3D) foi desenvolvido para melhor simular as condicoes in vivo de interacoes celulares e expressoes fenotipicas. Nesse sentido, os objetivos deste estudo foram desenvolver um modelo de cultura em esferoides para as linhagens celulares de carcinoma colorretal HT-29 e de carcinoma de pulmao de nao-pequenas celulas NCI-H460 e avaliar o efeito da quimioterapia neste modelo. Primeiramente foram realizados testes para padronizar o protocolo de cultivo 3D. A seguir a linhagem HT-29 foi exposta ao quimioterapico 5-Fluorouracil e linhagem NCI-H460 ao tratamento com cisplatina. A analise foi realizada por mensuracao do diâmetro dos esferoides antes do tratamento, 48 h apos o tratamento e depois a cada 3 dias, ate os esferoides se desintegrarem. Observamos que: a densidade celular ideal a ser utilizada para a formacao dos esferoides e 10 x 10 4 celulas para as duas linhagens celulares; o tempo necessario para a formacao dos esferoides foi de 5 dias para a linhagem HT-29 e 7 dias para a linhagem NCI-H460; a durabilidade dos esferoides e de 15 dias na linhagem HT-29 e 17 dias na linhagem NCI-H460; os esferoides nao tratados apresentaram um aumento significativo de diâmetro em relacao aos tratados. Com isso, concluimos que o metodo de formacao de esferoides proposto por esse trabalho permite o uso das linhagens HT-29 e NCI-H460 para estudos in vitro a fim de contribuir para o conhecimento em relacao a biologia do tumor e eficacia de agentes antineoplasicos.