MicroRNA-133b-5p通过靶向调控Fas基因影响H9c2心肌细胞凋亡

目的研究microRNA（miR）-133b-5p在H9c2心肌细胞凋亡中发挥的作用及其靶向调控Fas基因的机制。方法取对数生长期大鼠H9c2胚胎心肌细胞，分为空白对照组、miR-133b-5p抑制剂组、抑制剂阴性对照组。分别转染48h后收集细胞，实时荧光定量PCR（qRT—PCR）检测miR-133b-Sp表达，微板法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性，Annexin V-FITC联合PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶报告基因系统验证miR-133b-5p与FasmR—NA的3′UTR区的靶向结合。最后运用qRT—PCR和Western blot分别检测各组FasmRNA与Fas蛋白表达水平。结果miR-133b-5p抑制剂组细胞内miR-133b-5p表达水平下调至空白对照组的33％（P〈0．05）；LDH活性升高，细胞凋亡率增加，均明显高于空白对照组与抑制剂阴性对照组（P〈0．05）。双荧光素酶报告基因证明Fas是miR-133b-5p的一个靶基因；miR-133b-5p inhibitor显著上调FasmRNA和Fas蛋白水平（P〈0．05）。结论利用化学合成miR-133b-5p inhibitor抑制大鼠H9c2心肌细胞中miR-133b-5p表达，可诱导心肌细胞损伤和凋亡，其机制可能与调控靶基因Fas表达有关。