Evaluación de los cebadores ITS3 e ITS4 para la detección de infecciones por Candida spp. en muestras de flujo vaginal y humor acuoso Evaluation of ITS3 and ITS4 primers for detection of Candida spp. Candida spp. infections from vaginal simples and aqueous humor

Resumen Antecedentes. Los metodos convencionales para la identi -ficacion de levaduras del genero Candida requieren mucho tiempo, necesitan cantidad importante de la muestra y, en muchos casos, es necesario realizar cultivo. Objetivos. Evaluar un par de cebadores para la identifi-cacion de levaduras del genero Candida y demostrar su potencial aplicacion para el diagnostico de infecciones intraoculares. Materiales y metodos. Se utilizaron 17 cepas de referen-cia, 29 aislamientos clinicos de flujo vaginal, 7 muestras de humor acuoso y una de humor vitreo. Evaluamos tres metodos para el rompimiento de la pared celular: con-gelacion descongelacion, sonicacion, y la enzima liticasa. Para la purificacion del acido nucleico, se utilizo en los tres casos el estuche comercial Wizard Genomics ; en la reaccion de PCR, el estuche comercial Go Taq Green Master Mix y los iniciadores ITS3 e ITS4 a una concentracion de 0,5 µM. Resultados. De los tres metodos el que mejor resultados ofrecio fue el uso de enzima liticasa mas el estuche comer-cial. Con los iniciadores ITS3 e ITS4 fue posible identificar las levaduras unicamente a nivel de genero y no se presento reaccion cruzada con otros microorganismos comunmen -te encontrados en diferentes muestras de tejido humano. La sensibilidad fue de 100 fg. Se lograron identificar por PCR todos los aislamientos a partir de flujo vaginal y de una muestra de humor acuso. Para las demas muestras de humor acuoso el diagnostico fue para otros agentes causales, entre ellos,