FABP5: UN ENFOQUE TRANSCRIPTÓMICO EN BUSCA DE SUS FUNCIONES

Las proteinas que unen acidos grasos (FABPs) son proteinas pequenas citoplasmaticas que se expresan en casi todos los tejidos de mamiferos. Estudios previos han ayudado a elucidar los mecanismos de transferencia de acidos grasos (FA) por distintas FABPs, asi como sus estructuras y distribucion tisular. Sus funciones, sin embargo, aun estan en discusion. Se ha propuesto que estas proteinas podrian amortiguar el contenido de FA libres asi como direccionarlos hacia distintas rutas metabolicas. Las FABPs podrian transportar FA a diferentes compartimientos celulares dirigiendolos hacia su oxidacion, utilizacion en sintesis de lipidos complejos y/o regulacion de factores transcripcionales. Asi mismo, una de las funciones propuestas de las FABPs es la regulacion de la expresion genica por medio del direccionamiento de ligandos hacia receptores nucleares (NR). La regulacion de los NR por FABPs es compleja y, en muchos casos, no clara. Trabajo previo de nuestro laboratorio mostro que la alteracion de FABP5 conlleva a efectos pleiotropicos en el metabolismo de lipidos, proliferacion celular y adhesion, entre otros procesos, en celulas de adenocarcinoma de pulmon humano in vitro. Dada la pletora de targets de los NR que podrian estar afectados por esta FABP, un reto importante es identificar los procesos especificos en los que participa y los blancos responsables de la respuesta biologica. El plan de trabajo propone estudiar que vias reguladas transcripcionalmente por esta FABP son responsables de las alteraciones fenotipicas observadas previamente.  Hipotesis de trabajo: La FABP5 regula el metabolismo lipidico, la adhesion y proliferacion celular a traves de la alteracion de la expresion genica mediada por receptores nucleares. Objetivos Analizar el perfil de expresion resultante de la disminucion de FABP5 por medio de RNA-Seq. Screening. Se analizara el perfil de expresion diferencial de genes (DGE) por la disminucion de FABP5 en celulas en cultivo. Validar los principales DGE. Ensayos confirmatorios. Validar los genes diferencialmente expresados: Se validaran los resultados del analisis de RNA-Seq por PCR en tiempo real y Western Blot. Validar los receptores nucleares: Se validaran los NR comunes que surjan del analisis de las secuencias upstream de DGE con ensayos de genes reporteros, RNA de interferencia y agonistas / antagonistas especificos de NR. Validar los modelos celulares: Se validaran los resultados en distintos modelos celulares. 3: Evaluar la importancia de proteinas especificas codificadas por DGE en el fenotipo observado (metabolismo lipidico / proliferacion y migracion, entre otros) Se evaluara si los productos de los DGE por la deficiencia de FABP5 participan en la alteraciones del fenotipo celular (metabolismo lipidico, migracion y proliferacion, entre otros).