Detección y genotipado del virus del papiloma humano mediante una técnica de PCR a tiempo real: utilidad de la muestra de orina

La infeccion por el virus del papiloma humano (VPH) es una causa necesaria, aunque, por si sola, insuficiente para el desarrollo del cancer de cervix. Normalmente las infecciones por VPH se resuelven espontaneamente, pero un pequeno porcentaje de ellas, dan lugar al desarrollo de lesiones pre-neoplasicas que pueden derivar en lesiones invasivas de la mucosa produciendo el cancer. El tiempo medio entre la infeccion por el VPH y el desarrollo de las lesiones pre-neoplasicas suele ser de unos 10 anos y entre el desarrollo de estas ultimas y el cancer esta entorno a otros 10 anos. Actualmente estan descritos mas de 100 tipos de VPH, aunque solo un pequeno grupo de ellos, denominados de alto riesgo, son responsables del cancer de cervix. De este grupo de alto riesgo, los genotipos VPH-16 y VPH-18 son responsables de mas del 70% de los casos de cancer de cervix. Una caracteristica casi unica del cancer de cervix provocado por los genotipos VPH-16 y VPH-18, es que actualmente puede ser prevenido mediante campanas sistematicas de vacunacion. La infeccion por VPH es una infeccion de transmision sexual y por tanto, la primera forma de prevenir el cancer de cervix consiste en promover campanas de educacion sobre las practicas de riesgo y de vacunacion en jovenes, antes del inicio de las relaciones sexuales. En segundo lugar, la prevencion secundaria en mujeres no vacunadas, consiste en la realizacion de cribados mediante realizacion periodica de citologias y/o de pruebas moleculares de deteccion de ADN del VPH, en muestras cervicales y tratamiento asociado en los casos positivos. Actualmente esta demostrado que la deteccion del VPH es mas sensible y presenta un valor predictivo negativo mayor que la realizacion de citologias para la deteccion de lesiones pre-neoplasicas, por tanto, los diferentes programas internacionales de cribado de cada pais cada vez tienden a emplear las pruebas de VPH como prueba inicial del cribado de cancer de cervix. No obstante, los citados programas, que se basan en la toma de muestra cervical, requieren una infraestructura sanitaria y una cualificacion del personal sanitario que no siempre esta disponible, sobre todo, en paises en vias de desarrollo, en donde se concentra la mayor incidencia de este tipo de cancer. Por otro lado, existen barreras etnicas, culturales, religiosas, etc.... que impiden que muchas mujeres se sometan a la exploracion pelvica necesaria para la toma de muestra de cervix. Por lo tanto, los citados programas de cribado de cancer de cervix no llegan a toda la poblacion susceptible de someterse a ellos. En esta tesis se desarrolla un metodo basado en la tecnologia de PCR a tiempo real que permite simultaneamente la deteccion de la infeccion por el VPH y la de los genotipos VPH- 16 y VPH-18 que son los tipos mas oncogenicos como se ha comentado anteriormente. La segunda parte de la tesis se basa en la utilizacion de la misma tecnologia para la deteccion y genotipado del VPH en una muestra no invasiva como es la orina de las pacientes. De este modo, no tendrian que someterse a la exploracion pelvica favoreciendo el aumento de la cobertura sanitaria y tambien disminuyendo los costes asociados al cribado basado en la toma de muestras cervicales La conclusion principal consiste en que la muestra de orina puede ser empleada para la deteccion de infecciones por el VPH de alto riesgo y para la deteccion de lesiones preneoplasicas de alto grado