Modulation des activités (phospho)lipasiques : mise en oeuvre de la technique des fimls monomoléculaires pour l'étude d'inhibiteurs spécifiques et la détermination de la stéréo-sélectivité des enzymes lipolytiques
1991
Les lipases et phospholipases a#2 sont des enzymes qui agissent a l'interface lipide/eau. De ce fait, le modele cinetique de michaelis-menten ne peut etre applique en raison de l'insolubilite du substrat. De facon a mieux apprehender les phenomenes d'inhibition et d'inactivation des enzymes lipolytiques, nous avons etabli des modeles cinetiques pour les enzymes solubles agissant aux interfaces. Ceci nous a permis de definir un nouveau parametre, le pouvoir inhibiteur. Ces modeles ont ete appliques, dans le cas des systemes micellaires et des films monomoleculaires, pour rendre compte de l'inhibition de la phospholipase a#2 pancreatique par des analogues de substrats et de l'inactivation des lipases digestives par la tetrahydrolipstatine et des disulfures amphiphiles. L'etude de la fixation stereoselective de la phospholipase a#2 pancreatique sur des films d'analogues de substrat optiquement actifs, a montre qu'une plus grande quantite d'enzymes se liait aux films de la serie l, par comparaison avec les films de la serie d. L'etape stereoselective serait celle de fixation du monomere dans le site actif (de haas et al. ). L'utilisation d'analogues de diacylglycerols etales en films monomoleculaires nous a permis d'etudier la steroeselectivite des lipases. Nous avons montre que les lipases gastriques et pancreatiques sont enantioselectives de la position sn-3. La stereoselectivite de la lipase gastrique humaine est fortement dependante de la densite superficielle du lipide. Enfin, cette meme enzyme hydrolyse stereoselectivement la position sn-2 des 1(3)-octyl-2-octanoyl-glycerol. La phospholipase a#2 de plaquettes de rat a ete purifiee par immunoaffinite et caracterisee par la technique des films monomoleculaires. L'etude de l'inhibition par les analogues de phospholipides montre clairement que l'utilisation des phospholipases a#2 exocrines, telle que celles de pancreas ou de venin de serpents, n'est pas directement extrapolable au cas des phospholipases a#2 cellulaires
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