O88 Implication de l’isoforme neuronale de la NO synthase dans la sécrétion insulinique des îlots pancréatiques humains

Introduction La NO synthase neuronale (nNOS) peut, chez le rat, moduler a la fois l’amplitude et la cinetique de la secretion d’insuline. Notre objectif est de confirmer son expression dans les cellules β pancreatiques humaines et d’evaluer sa fonctionnalite. Materiels et methodes L’expression de la nNOS a ete etudiee dans des extraits d’ilots humains par RT-PCR quantitative ainsi que par Western Blot. Sa localisation cellulaire a ete precisee par immunofluorescence et microscopie confocale. Enfin, la secretion insulinique a ete evaluee sur 10 ilots pendant 90 minutes, en presence de concentrations croissantes de glucose et d’inhibiteurs pharmacologiques de l’enzyme, le Nω-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) et le 7-nitroindazole (7-NI), plus selectif de l’isoforme neuronale. Resultats La nNOS est exprimee dans les ilots pancreatiques humains tant au niveau ARN messager qu’au niveau proteique. Elle est preferentiellement cytoplasmique, mais aussi nucleaire et mitochondriale, et co-localise avec les granules de secretion d’insuline. Sur le plan fonctionnel, l’inhibition de l’activite nNOS par le L-NAME et le 7-NI stimule de facon dose-dependante la secretion d’insuline induite par le glucose. A 8,3 mM de glucose, la secretion d’insuline est de 24,3 ± 1,9 ng/mL/10 ilots/90 min et est amplifiee a 29 ± 3,6 et 34,5 ± 3,37 en presence de respectivement 5 mM (non significatif) et 10 mM (p  Discussion Des resultats similaires avaient precedemment ete retrouves chez le rat. D’autres experiences associant inhibiteurs de l’activite cytochrome c reductase et donneurs de NO sont necessaires pour preciser le role des differentes activites catalytiques de l’enzyme . Conclusion La nNOS est exprimee dans les cellules β humaines et intervient dans la regulation de la secretion insulinique glucose-dependante.