AVALIAÇÃO DA IDADE DAS CADELAS QUE VIERAM A ÓBITO COM O SUBTIPO MOLECULAR TRIPLO-NEGATIVO

As neoplasias mamarias estao entre os tumores mais comuns nas cadelas constituindo aproximadamente 50% de todas os tumores que acometem as femeas caninas, e destes 60% a 89% apresentam caracteristicas de malignidade. Essas neoplasias acometem com maior frequencia as femeas de 7 a 12 anos de idade. Varios estudos tentam classificar os tumores mamarios caninos por subtipo molecular, entretanto o subtipo triplo-negativo nao esta muito bem definido em cadelas. Este subtipo e caracterizado por apresentar tumores agressivos, possuindo um prognostico ruim, sobrevida mais curta, pre-disposicao para recidivas precoces e metastases a distâncias. Como as neoplasias mamarias em cadelas vem sendo muito estudas por servir de modelo comparativo para a doenca em mulheres, o objetivo desse estudo foi avaliar a idade predominante do subtipo molecular triplo-negativo em cadelas atendidas no hospital veterinario da Universidade de Franca que vieram a obito. Foi realizado um estudo retrospectivo que incluiu 22 amostras de tumores mamarios de cadelas diagnosticadas com subtipo triplo-negativo (RE-, RP- e c-erbB-2-) de animais atendidos no periodo de 2011 a 2013. A tecnica imuno-histoquimica empregada foi o sistema de deteccao livre de biotina (REVEAL). Apos a desparafinizacao e reidratacao dos cortes com 4 (μm), foi realizada a recuperacao antigenica pela desnaturacao em calor umido mediante incubacao em solucao tampao pre-aquecido, especifico para cada anticorpo por 20 minutos. As diluicoes para os anticorpos de estrogeno, progesterona e c-erbB-2 foram 1:200, 1:600 e 1:500, respectivamente. Seguiu-se o bloqueio da peroxidase endogena por 20 minutos, e foram incubados por cinco minutos em solucao de lavagem TBS 20. Em seguida, foi realizado por 20 minutos, o bloqueio das reacoes inespecificas, e posteriormente adicionado o anticorpo primario, e mantidos em incubacao a 4oC por 18 horas em câmera umida. Decorrido o periodo de overnight, a deteccao da reacao imune foi utilizada pelo kit Reveal biotin-free Polyvalente HRP- Spring, por 25 minutos, e revelados pelo substrato cromogenico 3,3’ diaminobenzidina (DAKO liquid DAB), contracoradas pela hematoxilina de Harris por um minuto, e entao lavados em agua corrente. Os controles positivos foram utilizados utero normal de cadela para os anticorpos RE e RP, e para c-erbB-2, usadas neoplasias humanas sabidamente marcadas. Nos controles negativos foram substituidos os anticorpos primarios pelo diluente de anticorpo. A observacao foi feita em microscopio de luz binocular. O escore de positividade para os receptores RE e RP foi determinada pela avaliacao quantitativa e qualitativa de acordo com o metodo Allred et al. (1998) (1), sendo considerados tumores negativos para RE e RP escores menores que tres. Quanto aos marcadores de membrana c-erbB-2, foi determinado um escore semi-quantitativo de acordo com metodo HercepTest, e considerados tumores negativos para receptores c-erbB-2 aqueles tumores sem marcacao, com marcacao fraca ou incompleta da membrana, classificados com 0 e 1+, respectivamente. Para a comparacao entre as medias de idade dos animais que vieram a obito foi realizada o Teste t, com nivel de significância 5%. No presente estudo a idade dos animais que apresentaram o subtipo molecular triplo-negativo variou de cinco a 16 anos, tendo sido a idade media de 10,28 ± 2,74 anos, sendo que 52% (n=11) dos animais apresentaram idade acima da media (>10 anos) e 48% (n=10) estavam abaixo da media de idade (<10 anos). Em um dos casos nao foi informada a idade. Para tanto, foi avaliada a media de idade dos animais triplo-negativos que vieram a obito em decorrencia da doenca (metastase), sendo a idade de 10,25 anos, e dos animais que nao vieram a obito a media foi de 8,8 anos, nao havendo diferenca significativa (p=0,184) entre ambos. Com este estudo pode-se concluir que o subtipo molecular triplo-negativo e mais expressivo em animais idosos que apresentam media de idade acima de 10 anos.