Isolement et caractérisation moléculaire de cellules rares circulantes individuelles : développement de nouvelles approches méthodologiques en oncologie prédictive et diagnostic prénatal

L’objectif principal de ce projet de recherche doctorale est la mise au point d’approches methodologiques fiables et reproductibles permettant la caracterisation genetique de cellules rares circulantes isolees par la methode de filtration ISET® (Rarecells®, France). La premiere application developpee consiste en la detection des mutations du gene suppresseur de tumeur VHL (Von Hippel Lindau) dans les cellules rares circulantes (CRC) uniques isolees du sang de 30 patients atteints de carcinome renal a cellules claires (CRCC), et realisee comparativement a l’analyse cytopathologique. L’etude genetique a egalement ete conduite en parallele dans les 30 tissus tumoraux correspondants. Les resultats ont mis en lumiere une potentielle complementarite de l’approche de genetique moleculaire sur cellules uniques avec l’analyse cytomorphologique de reference et suggerent que combiner ces approches permettrait d’obtenir une plus grande sensibilite de detection des cellules cancereuses circulantes chez les patients atteints de CRCC. Une deuxieme application a consiste en le developpement d’une approche innovante pour le diagnostic prenatal non-invasif des maladies genetiques recessives par analyse de cellules trophoblastiques rares collectees au niveau du col de l’uterus. Enfin, des developpements supplementaires ont permis d’optimiser les analyses de sequencage a haut debit et de les appliquer a des CRC individuelles isolees par ISET®. Cette nouvelle approche, associee a l’isolement de CRC non fixees, est en mesure de fournir des donnees genetiques elargies a l’exome entier pour des applications a la fois en oncologie predictive et en diagnostic prenatal non invasif.