BMP-2 和地塞米松对人牙髓细胞增殖和分化的影响

目的通过将 BMP-2 和地塞米松分别及联合作用于体外培养的人牙髓细胞，探讨两者对牙髓细胞增殖和分化能力的影响。方法取 25 岁以下患者因正畸原因拔出的无病变牙牙髓组织，采用组织块法体外培养人牙髓细胞并传至第3代，行波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学染色鉴定。取生长状况良好的第 3～5 代牙髓细胞分为 4 组，A、B、C 组分别加入 100 ng/mL BMP-2、1×10–8 mol/L 地塞米松、100 ng/mL BMP-2 以及 1×10–8 mol/L 地塞米松，D 组不添加诱导剂作为对照组。培养 1、3、5、7 d 绘制细胞生长曲线；培养 5、7 d 行 RT-PCR 检测成牙本质细胞形成标记基因表达情况，包括牙本质涎磷蛋白（dentin sialophoshoprotein，DSPP）、牙本质基质蛋白 1（dentin matrix protein 1，DMP-1）、ALP；培养 14 d 行 ALP 染色并计算阳性染色面积占总面积比值；培养 21 d 行茜素红染色并测定 562 nm 波长处吸光度（A）值。结果成功分离培养呈长梭形的人牙髓细胞，经波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学染色鉴定显示符合牙髓细胞的生物学特征。随培养时间延长，各组细胞均逐渐增加，5 d 时达峰值，7 d 时降至 3 d 水平。培养 5 d，A、B、C 组细胞显著多于 D 组，C 组多于 A 组，A 组多于 B 组，比较差异均有统计学意义（P 0.05）。培养 7 d，除 A、B、C 组 DSPP mRNA 相对表达量显著高于 D 组（P 0.05）。培养 14 d ALP 染色示，各组可见紫黑色沉淀，其中 C 组着色程度最深；经半定量测定，C 组阳性染色面积占总面积比值显著高于 A、B、D 组，A、B 组高于 D 组，差异均有统计学意义（P 0.05）。培养 21 d 茜素红染色示，C 组矿化结节呈片状大面积分布，A、B 组呈散在分布，D 组无矿化结节形成；各组间A 值比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论BMP-2 对牙髓细胞的增殖作用比地塞米松更明显，两者对牙髓细胞分化作用差异不明显；但与单独应用相比，两者联合应用对牙髓细胞的增殖和分化有明显促进作用。