灵猫方抑制饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬研究

目的研究灵猫方对饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬的作用。方法选取15只SD大鼠制备灵猫方药物血清,设立厄尔平衡盐缓冲液（Earle＇s balanced salt solution,EBSS）组、EBSS＋空白血清组、EBSS＋5倍药物血清组、EBSS＋10倍药物血清组及DMEM组,每组3个样本。培养HepG2.2.15细胞1、2、4及6h,构建pEGFP-N1-LC3B表达载体,转染HepG2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察细胞浆中GFP-LC3B分布表达变化,计算点状样GFP-LC3B的细胞数与GFP-LC3B转染HepG2.2.15细胞数比值。透射电镜观察各组HepG2.2.15细胞浆内自噬体。Western Blot检测各组HepG2.2.15细胞LC3BⅡ/Ⅰ比值（microtubule-associ-ated protein 1 light chain 3 betaⅡ/Ⅰ）。结果培养2h时,与EBSS＋空白血清组比较,EBSS＋5倍药物血清、EBSS＋10倍药物血清明显抑制GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变（P〈0.01）,电子透射电镜显示EBSS＋5倍药物血清组、EBSS＋10倍药物血清组抑制自噬体形成,Western Blot检测显示EBSS＋10倍药物血清组LC3BⅡ/Ⅰ比值较EBSS＋空白血清组明显下降（P〈0.01）。结论灵猫方药物血清抑制饥饿诱导HepG2.2.15的自噬。