Identificação específica do gênero Rhodnius (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) por MALDI-TOF-MS

Introducao:Triatominae sao insetos hematofagos envolvidos na transmissao da doenca de Chagas, atualmentesao admitidas 151 mais duas fosseis, a maioria distribuidas na regiao Neotropical. Os generos commaior importância epidemiologica quanto a veiculacao de Trypanosoma cruzisao Panstrongylus, Rhodniuse Triatoma. A competencia vetorialdos triatomineos pode ser altamente variavel,dependendo da especie. A identificacao e, portanto, fundamental para vigilância epidemiologica no que se refere a veiculacao deT. cruzi. Assim, existe a necessidade de contornar as dificuldades para a identificacao morfologica de especies semelhantese tambem os altos custos relacionados a utilizacao dos metodosmoleculares. Neste sentidopropoe-se um metodo alternativo para identificacao de Triatominae, mais especificamente deRhodnius, emrazao das dificuldades enfrentadas para a caracterizacao das especies desse genero. Objetivo: Realizar um novo protocolo para a identificacao das especies do genero Rhodnius por meio do metodo MALDI-TOF-MS.Metodologia:As 12 especies de Rhodnius foram obtidas do insetario de Triatominae da Faculdade de Ciencias Farmaceuticas/UNESP Araraquara, onde sao mantidas vivas em frascos de vidro e designadas pela sigla CTA (Colonia de Triatominae Araraquara) seguida por um numero que indica a quantidade de colonias ja estabelecidas. No insetario existe tambem um catalogo onde registra-se o local onde foram coletados os primeiros exemplares .Foi testado um protocolo eficiente para diferenciar as especies de Rhodniuspor meio da identificacao de peptideos e proteinas, partindo de quatro diferentes metodos de extracao: A) Acetonitrila/acido formico (ACN/AF), B) Acetonitrila/acido trifluoroacetico (ACN/TFA), C) Isopropano/acido formico (IPA/AF) e D) Metanol/acido formico (MeOH/AF), e quatro tipos de matrizes de MALDI/TOF: Acido a-cyano-4-hydroxycinnamic acid (CHCA), sinapinic acid (SA), 6-aza-2-thiothymine (ATT), e 2,6- dihydroxyacetophenone (DHAP). Resultados e discussao: Os experimentos foram realizados combinando os quatros solventes e as quatro matrizes para selecionar a melhorextracao/matriz de MALDI. Considerando o numero de ions detectados e intensidade relativa, o metodo de extracao B (ACN/acido trifluoacetico) com matriz CHCA resultou nos melhores espectros. Conclusao: As especies de Triatominae sao vetoras de T. cruzi, agente etiologico da doenca de Chagas que e endemica em 21 paises da regiao Neotropical. A aplicacao da tecnica de MALDI-TOF-MS, pela abordagem de impressao digital de espectros de massa combinada com metodos quimiometricos, foi capaz de distinguir com precisao 12 especies do genero Rhodnius, que trazem dificuldades para a identificacao por meio dos caracteres morfologicos. Assim a metodologia descrita neste artigo pode ser aplicada com rapidez, eficiencia e baixo custo quando comparada a outras tecnicas de alta precisao, em um grande numero de amostras para identificacao de especies de Triatominae.