Aislamiento y purificación de prolactina humana. ii. purificación y caracterización parcial

En este trabajo se describe un sistema cromatografico en dos etapas que permite la purificacion de prolactina humana (hPRL), a partir del residuo obtenido despues de la extraccion con solucion salina de hipofisis conservadas congeladas. La PRL se solubilizo en acetato de amonio 50 mM, pH 10 y se purifico por medio de cromatografia de interaccion hidrofobica, sobre el soporte Fenil-Sepharosa en presencia de un gradiente lineal de acetonltrilo (0-40%). La fraccion con actividad de PRL se aplico a una columna de DEAE-Celulosa en presencia de acetonitrilo (20%) y se eluyo con un gradiente salino. El rendimiento del proceso fue de 7.75 mg PRL por 100 glandulEis, lo que corresponde a una recuperacion global de 33%. Por radioinmunoanalisis especifico (RIA) se encontro una potencia de 10.6 Ul/mg de proteina en la preparacion final. El analisis electroforetico mostro dos componentes principales de pesos 27.000 Dattons, que corresponde al monomero principal y 64.000 Daltons, que sugiere una forma agregada o glicosilada, cuya existencia ha sido reportada en el suero. La presencia de isohormonas tambien fue detectada por el analisis de electroenfoque, encontrandose un valor de punto isoelectrico (PI) de 5.7 para la especie principal. Este comportamiento tambien se observo con la preparacion internacional de referencia usada en este trabajo.