Cloning and expression of human cytomegalovirus UL123 gene exon 2, 3 in bacterial two-hybrid bait plasmid

目的 构建和鉴定人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因外显子2,3(ie1-exon2,3)的诱饵质粒,并评价其用于筛选胎儿脑文库的可行性.方法 以重组质粒pTWIN1/ie1为模板扩增ie1-exon2,3,克隆入pBT质粒,转化E.coli XL1-Blue MRF'Kan,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,提取阳性重组质粒转化入细菌双杂交系统报告菌株,诱导表达重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western Blot对表达产物进行鉴定,并进一步鉴定重组子自身激活作用.结果 在细菌双杂交系统中成功构建了细菌双杂交诱饵质粒pBT/ie1-exon2,3,并在报告菌株中表达了重组融合蛋白rIE1-N85/λC1,且pBT/ie1-exon2,3无自身激活作用.结论 成功构建了无自激活作用的诱饵质粒pBT/ie1- exon2,3,可用于筛选胎儿脑文库。