Requerimento de receptores scavenger na sinalização via TLR4 para a produção de óxido nítrico por macrófagos estimulados com LPS: papel na ativação de IRF-3 e STAT-1

O oxido nitrico (NO) e uma molecula versatil com efeitos tanto toxicos quanto regulatorios. Em macrofagos, o papel antimicrobiano do NO e, ate a data, o mecanismo letal ou inibitorio mais evidente, descrito para um grande numero de microrganismos, devido aos seus efeitos diretos e indiretos. O papel do TLR4 na transcricao de iNOS induzida por LPS esta relacionado a inicializacao de um complexo de sinalizacao celular que induz a producao da citocina IFN-β, a sintese de IRF-1 e a ativacao de NF-kB e STAT-1, fatores de transcricao necessarios para a sintese de iNOS. A absorcao de uma concentracao elevada de LPS (1 ug/ml) e mediada pelo receptor Scavenger (SR-A), com a participacao de CD14, atuando em conjunto com o receptor TLR4 nas respostas inflamatorias ao LPS. A literatura sobre a sinalizacao de SR-A em macrofagos e restrita e muitas vezes contraditoria. Os mecanismos pelos quais o LPS promove a interacao do SR-A com TLR4 e suas vias de sinalizacao precisam ser melhor compreendidos. O principal objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do estimulo de LPS na via de TLR4 associada ao SR-A para a producao de NO em macrofagos peritoneais de camundongos C57BL/6. Nossos experimentos confirmam que os camundongos TLR4 knockout nao produzem NO quando estimulados apenas com LPS, mas a adicao conjunta de LPSe IFN-β restaura a capacidade destes macrofagos de expressar iNOS e produzir NO. Estes resultados sugerem que o LPS pode estimular os macrofagos por outro receptor diferente do TLR4. A inibicao de SR-A usando DSS ou anticorpo neutralizante anti-SR-A mostrou que a associacao entre SR-A e TLR4 e essencial para a expressao de iNOS e a producao de NO. Os nossos resultados comprovam que TLR4 e SR-A atuam em conjunto principalmente na ativacao da via TLR4-TRIF para a producao de IFN-β e, consequentemente, promovendo a sintese de STAT-1 e de IRF-1, que agem em conjunto para ativar a producao de NO em macrofagos.