Respuesta inflamatoria temprana de monocitos humanos expuestos a lipoproteínas y cortisol

La aterosclerosis es una enfermedad de evolucion cronica en la que coexisten desordenes del metabolismo de los lipidos con procesos inflamatorios y autoinmunes. En este proyecto, nos preguntamos si podria haber un proceso a nivel sistemico, en la que el monocito circulante precondicione su respuesta en virtud del contexto lipidico e inflamatorio en que se desenvuelva, de modo que tenga una determinada predisposicion aterogenica al llegar a la lesion y convertirse en residente. Para abordar este estudio se trataron monocitos humanos, extraidos de sangre periferica y monocitos humanos de la linea inmortal THP-1, con concentraciones fisiologicas de componentes lipidicos e inflamatorios sistemicos (LDL, HDL, LDL oxidadas y cortisol) que podrian determinar la respuesta inflamatoria de las celulas. Tal respuesta se caracterizo in vitro, valorando tras el tratamiento citoquinas extracelulares por citometria de flujo y ELISA. Los experimentos sellevaron a cabo en presencia y ausencia de un agente inductor de inflamacion reconocido a este nivel, la IL-1Beta. Las citoquinas valoradas fueron IL-6, TNFalfa, IL-8 e IL-10. Para caracterizar mejor la respuesta inflamatoria inducida del monocito a las lipoproteinas y el cortisol, se disenaron experimentos en los que se evaluaba el papel de estas moleculas en la activacion de NF-kB por EMSA. En este estudio se llevaron a cabo cineticas de activacion de NF-kB para ver diferencias en la respuesta del monocito inducido en presencia de LDL, HDL, cortisol, LDL-cortisol y HDL-cortisol. En los extractos nucleares y citosolicos de los monocitos tratados se valoro IkBalfa por Western Blot, para ver si la activacion de NF-kB era dependiente de la degradacion de su inhibidor. La ultima parte del trabajo que recoge la memoria valoro las diferencias entre monocitos de individuos sanos y pacientes hipercolesterolemicos a nivel de receptores nucleares de la familia de PPAR y LXR, concretamente se valoro el RNAm para ABCA-1 y CD36 por PCR cuantitativa. Estos receptores son determinantes en la respuesta del monocito y en la genesis y desarrollo de la aterosclerosis.