Influência do Sêmen de Diferentes Touros sobre as Taxas de Fecundação In Vitro e Desenvolvimento de Embriões

A producao in vitro de embrioes (PIVE) e uma biotecnologia utilizada amplamente na bovinocultura com o proposito de obter um maior numero de embrioes, gestacoes e nascimentos de uma unica doadora em um curto periodo de tempo, acelerando deste modo a producao de animais geneticamente superiores. Para o sucesso de um sistema de PIVE, e necessario um processo de fecundacao in vitro (FIV) eficiente, capaz de proporcionar alta taxa de penetracao espermatica. O semen utilizado apresenta variacoes no resultado final do processo da FIV e no desenvolvimento embrionario, sendo que existem diferencas na fertilidade dos touros tanto a campo, como na PIVE. Essas variacoes podem ser causadas por diversos fatores como: raca, linhagem, idade, estado corporal, nutricao, genetica e o ambiente. Este estudo teve como objetivo avaliar a influencia do semen de diferentes touros na capacidade fecundante e posterior desenvolvimento embrionario in vitro. Foram conduzidas cinco repeticoes, utilizando-se 440 oocitos bovinos obtidos de ovarios de abatedouro, atraves de aspiracao de foliculos de 2 a 8-mm. Apos selecao, os oocitos foram maturados in vitro (MIV) por 24 horas em TCM199 acrescido de LH, FSH, EGF e 10% de soro egua em estro (SEE) em estufa a 39oC, umidade saturada e 5% CO2 em ar.  Decorrido o periodo de MIV, os oocitos foram transferidos para o meio Fert-TALP com heparina e PHE, onde foram co-incubados por 18h com semen dos quatro touros, compondo os diferentes tratamentos: T1, T2, T3 e T4. A dose inseminante utilizada foi de 2x106 espermatozoides/ml, sendo o semen de quatro touros previamente selecionados pelo metodo de centrifugacao em gradientes de mini-Percoll. Decorrido o periodo da FIV, vinte dos provaveis zigotos de cada tratamento, por repeticao, foram corados com Hoechst 33342, e avaliados em microscopio de epifluorescencia quanto a formacao de pro-nucleos, sendo considerados fecundados os oocitos com dois ou mais pro-nucleos. Dois provaveis zigotos de cada tratamento, por repeticao, foram cultivados em SOFaaci + 10% SEE e BSA em pocos individuais, recobertos por oleo mineral, acondicionadas no interior da incubadora sob as mesmas condicoes, em um sistema de monitoramento embrionario (Primo Vision, Cryo Mangement Ltda, Hungria), onde foi realizada a captura de imagens dos embrioes a cada 5 minutos durante 48h. O desenvolvimento embrionario foi avaliado pela taxa de clivagem (48h apos a FIV) e pelo momento da primeira clivagem, sendo considerados clivados aqueles com duas ou mais celulas. Os dados foram comparados pelo teste de qui-quadrado X2 (p < 0,05). A taxa de fecundacao foi semelhante entre os tratamentos T1 (29%), T2 (58%), T3 (52%) e T4 (65%). No desenvolvimento embrionario, nao houve diferenca entre os indices de clivagem que foram de 78, 83, 86 e 82%, para os tratamentos T1, T2, T3 e T4, respectivamente.  O tempo medio da primeira clivagem foi de 31,7, nao diferindo entre tratamentos.  Estes dados demonstram que nao houve influencia dos touros testados na taxa de fecundacao ou desenvolvimentos embrionario ate 48h.  Novos estudos devem ser conduzidos, visando avaliar a qualidade da fecundacao e formacao de blastocistos.