Validação de protocolo de extração de RNA sem uso de nitrogênio líquido e avaliação da “vida de prateleira” de pellets

A extracao de RNA de plantas a partir de tecidos especificos e o primeiro passo para estudos de expressao genica e caracterizacao de transcritos. Nos protocolos de rotina, o uso do nitrogenio liquido e indispensavel para auxiliar a retirada dos acidos nucleicos do interior das celulas durante o processo de maceracao. No entanto, sabe-se que o custo do de nitrogenio liquido e bastante elevado. A possibilidade de aliar rapidez a robustez e baixo custo aos protocolos, contribui para o dinamismo e contencao de gastos em laboratorios, que, ao final de um ano, podem trazer muitos beneficios. Com o aumento do uso de tecnicas de sequenciamento de alto high-throughput (HTS), muitas vezes conduzido no exterior, o RNA acaba sendo degradado na chegada ao destino final – principalmente com a proibicao recente das companhias aereas do uso do gelo seco para manter a integridade da molecula. Portanto, o objetivo da proposta foi validar um novo protocolo para extracao de RNA com uso de furadeira de bancada, bem como avaliar a “vida de prateleira” dos pellets de RNA de forma a promover um transporte mais adequado permitindo menor degradacao da molecula. Para isso foram feitas as extracoes do RNA de folhas e raizes das principais culturas da Embrapa Mandioca e Fruticultura, a citar: bananeira, abacaxi, citros, mamao, maracuja e mandioca. A integridade do RNA total das folhas e raizes foram validadas via geis de agarose 1%. Uma vez obtidos os pellets de RNA, foi avaliada a “vida de prateleira” dos mesmos, onde as amostras foram submetidas a temperatura ambiente por 21 dias. A extracao de acidos nucleicos com uso da furadeira de bancada foi idealizada no CIRAD – Baillarguet em Montpellier – Franca e CIP-Lima Peru. O metodo de extracao com auxilio da furadeira de bancada mostrou-se eficiente na obtencao de RNA de qualidade, que esta contribuindo para reducao de gastos no laboratorio de Biologia Molecular. O teste de conservacao do pellet de RNA “vida de prateleira” foi altamente satisfatorio, com manutencao da integridade da molecula visualizada em gel de agarose 1% apos 3 semanas em bancada em temperatura ambiente. Certamente essa informacao e de grande valia tambem para os pesquisadores que dependem do transporte de RNA para outros paises visando analises HTS.