Detecção molecular de Salmonella Gallinarum e diferenciação de isolados de campo da cepa vacinal SG9R

O tifo aviario e uma enfermidade causada pela Salmonella enterica sorovar Gallinarum (SG). Apesar de historicamente ser de baixa ocorrencia no Brasil, surtos desta doenca tem sido recorrentes em alguns Estados. A cepa atenuada 9R (SG 9R) e utilizada com sucesso em programas de vacinacao em varios paises, porem a dificuldade de diferencia-la de cepas de campo restringe o seu emprego de forma mais extensiva. Recentemente foi desenvolvida uma tecnica (duplex PCR) capaz de detectar a presenca de SG e identificar no mesmo ensaio a cepa vacinal SG9R. Esta tecnica mostrou-se eficiente na caracterizacao de SGs que circularam na Coreia, e assim, o presente estudo teve como objetivo verificar se esta metodologia e capaz tambem de detectar e diferenciar SGs que tem circulado no Brasil. Para tanto, foram analisadas amostras isoladas de Salmonella Gallinarum provenientes de 19 lotes de uma regiao onde ocorreu um surto no Rio Grande do Sul em 2013. Seis lotes se caracterizaram pela presenca de aves com sinais clinicos compativeis com tifo aviario, enquanto 13 lotes foram provenientes de aves vacinadas sem manifestacoes clinicas da doenca. A tecnica de duplex PCR confirmou a cepa vacinal 9R nos 13 lotes vacinados, enquanto os demais lotes apresentaram o padrao nao vacinal, indicando que a tecnica e eficiente na diferenciacao dos isolados. Posteriormente, atraves de um estudo retrospectivo, foram analisadas 56 amostras, fornecidas gentilmente por um laboratorio comercial. As amostras consistiram de inoculos em agua peptonada que foram preparadas a partir de coletas em lotes de diferentes Estados do pais. Estas foram caracterizadas como a) cultivos SG positivas, b) cultivos Salmonella positivas com sorotipos nao relacionados com SG e c) culturas mistas onde nao foi possivel identificar o sorotipo.  Para verificar a viabilidade das amostras, realizou-se inicialmente a deteccao generica de Salmonella pela PCR em tempo real. Estavam viaveis para tipificacao 26 amostras de SG, 12 sorotipos nao relacionados com SG e 6 amostras com infeccao mista.  No procedimento de tipificacao com o duplex PCR todas as amostras identificadas previamente como SG foram confirmadas pelo teste, dos quais 4 compativeis com a cepa SG9R. Por outro lado, nao se observou conflito de resultados em nenhuma das amostras nao relacionadas com SG (12), confirmando a especificidade do teste. Por fim, dentre as 6 amostras previamente identificadas como culturas mistas, constatou-se a presenca de 2 casos de SG, demonstrando que a tecnica possui capacidade de tipificacao inclusive em cultivos mistos. Este estudo indica que a tecnica de duplex PCR e eficiente em detectar e tipificar SG que circularam no pais, e a mesma pode ser utilizada no monitoramento de programas de vacinacao e tambem como ferramenta para o diagnostico de tifo aviario.