猪链球菌2型分泌性核酸酶A（SsnA）活性检测及其基因序列的克隆与测序分析

对8株猪链球菌2型重庆分离株的核酸酶A全基因进行克隆测序，结果表明该基因长度为3126bp，与GenBank发表的唯一的该基因的序列相比，核苷酸同源性高于98％，推导的氨基酸同源性高于94％。根据核酸酶A基因的测序结果建立扩增片段长度为301bp的PCR检测方法，并用甲苯胺蓝DNA酶琼脂对猪链球菌分泌性核酸酶A的活性进行检测。检测了从病猪内脏分离的猪链球菌致病株35株，33株核酸酶A基因PCR检测阳性（阳性比例为94．3％），其中有24株分泌活性检测为阳性（阳性比例68．6％）；正常猪扁桃体分离株14株，PCR检测为阳性的10株（阳性比例71．4％），其中有核酸酶A分泌活性为8株（阳性比例57．1％），检测菌株中有2型猪链球菌44株，38株扩增出核酸酶A基因的片段PCR检测阳性并且分泌活性为阳性的有32株，猪链球菌1型、7型、9型、13型、1／2型各1株，均能扩增出核酸酶A基因的片段，但只有13型猪链球菌有核酸酶A分泌活性。对猪链球菌在不同生长时期核酸酶活性的检测显示，猪链球菌在培养4、8、16、32、48h均有核酸酶A的分泌，并且Ca^2＋和Mg^2＋为分泌性核酸酶A的活性必需因子。