Validación de protocolos de PCR para el diagnóstico molecular de la Enfermedad de Chagas

La enfermedad de Chagas es causada por el parasito Trypanosoma cruzi. Esta enfermedad comprende una fase aguda, seguida de una fase cronica, con una parasitemia escasa y una clinica que va desde la ausencia de sintomas hasta una cardiopatia severa. El diagnostico presenta limitaciones, debido a la baja sensibilidad de las tecnicas parasitologicas y la baja especificidad de las inmunologicas. Las tecnicas de PCR son una alternativa, pero estas deben ser estandarizadas y validadas antes de su uso. El objetivo de este trabajo fue validar las tecnicas de PCR para la amplificacion de ADN de minicirculo de kinetoplasto (PCR-ADNk) y ADN satelite (PCR-ADNsat) de T. cruzi. Se utilizaron 29 muestras de sangre y 19 de suero de pacientes diagnosticados previamente y 3 muestras de xenodiagnostico de un paciente en fase aguda, resultando positivas por PCR-ADNk 26/29 (89,7%) y por PCR-ADNsat 23/29 (79,3%), mientras que utilizando suero resultaron positivas por PCR-ADNk 5/19 (26,3%) y por PCR-ADNsat 7/19 (36,8%). Las 3 muestras de xenodiagnostico resultaron positivas (100%). Ademas, se analizaron 24 muestras de sangre y suero de individuos, negativos para las tecnicas de diagnostico parasitologico e inmunologico y sin factores de riesgo de la enfermedad, los cuales dieron negativo por ambas PCRs. La muestra de eleccion resulto ser sangre y se recomienda el uso de las dos tecnicas de PCR en conjunto, ya que todos los pacientes con enfermedad de Chagas confirmada resultaron positivos (100%) por lo menos en una de las PCR evaluadas en muestras de sangre