La réplication de l'ADN chez l'euryarchaea Pyrococcus Abyssi : mise en place et dynamique du complexe

La replication de l'ADN se fait par le biais d'un complexe proteique appele replisome. La comprehension des aspects structuraux et dynamiques necessite sa reconstitution in vitro a partir des sous-unites individuelles. Chez tous les organismes vivants, la phase d'elongation de l'ADN, effectuee par les ADN polymerases, met en jeu un facteur de processivite (PCNA) qui est charge sur l'ADN par un facteur de chargement (RF-C). Generalement, les proteines des archees, impliquees dans la replication de l'ADN, ont plus de similitudes avec leurs homologues eucaryotes que bacteriens. L'etude presentee ici a porte sur les mecanismes de chargement du PCNA et de synthese d'ADN chez l'Euryarchaea hyperthermophile Pyrococcus abyssi. Afin de mieux cerner certaines interactions proteine-proteine et proteine-ADN, des versions mutantes du PCNA et des ADN polymerases (Pol B et Pol D) ont ete produites. Il a ete montre que le PCNA est capable de se charger spontanement sur l'ADN ; ce chargement est stimule par le RF-C mais egalement par la Pol B qui stabilise son facteur de processivite par un motif essentiel. D'un autre cote, le complexe PCNA/Pol B est destabilise en presence d'ARN et de dNTPs. De plus, il a ete montre que la Pol D presente plus d'un motif de liaison au PCNA. Malgre ce motif additionnel, la Pol D est deplace du PCNA par la Pol B Ces resultats, couples a ceux precedemment obtenus, permettent de proposer un modele moleculaire dynamique de la fourche de replication pour le phylum Euryarchaea