ANTICUERPOS ANTI-RECEPTORES β1 ADRENÉRGICOS EN PACIENTES CON ENFERMEDAD DE CHAGAS: ESTANDARIZACION DE LA PRUEBA (ELISA) CON EL PEPTIDO SINTETICO DE LA SEGUNDA ASA EXTRACELULAR DEL RECEPTOR β1 ADRENÉRGICO

La Enfermedad de Chagas (ECh), es causada por el agente etiologico Trypanosomacruzi (T. cruzi) y es el principal causante de cardiomiopatias cronicas en America Latina.Probablemente el dano cardiaco es la consecuencia no solamente de la persistencia delparasito en el tejido cardiaco sino tambien de una regulacion defectuosa de la respuestainmunitaria (teoria autoinmune)derivada de la auto-reactividad contra antigenos propios.Se ha demostrado la presencia de anticuerpos dirigidos contra la segunda asa extracelulardel receptor β1 adrenergico en suero de pacientes conECh. La estandarizacion de la pruebaes necesaria para garantizar la obtencion de resultados confiables y comparativos en ladeterminacion de la presencia de anticuerpos anti-β1 adrenergicos en pacientes en fasestempranas de la infeccion y vigilar de cerca su evolucion clinica. Se ensayaron diferentesconcentraciones del antigeno (30μg/ml, 50μg/ml y 70 μg/ml), diluciones de los sueros (1/20,1/50, 1/60) y del conjugado (anti-IgG humano, acoplado a fosfatasa alcalina) en placas de96 pozos con sueros de personas con ECh con alta, media y baja reactividad en el ELISAde diagnostico asi como de personas negativas a fin de fijar el punto de corte de la prueba.Las condiciones evaluadas para la estandarizacion de la prueba resultaron apropiadas para ladeteccion de los anticuerpos anti-β1 adrenergicos en pacientes con Enfermedad de Chagas. ANTIBODIES ANTI - RECEPTOR β1 ADRENERGIC CHAGASDISEASE PATIENTS: STANDARIZATION TEST (ELISA) WITHSYNTHETIC PEPTIDE OF THE SECOND EXTRACELLULARRECEIVER ASA β1 ADRENERGIC Abstract: Chagas disease is caused by the etiologic agent tripanosomacruzi (T. cruzi)and is the maincause of chronic cardiomyopathy in Latin America. Probably the heart damage is a resultnotonly the persistence of the parasite in the cardiac tissuebut also of a defective regulation ofthe immune response (autoimmune theory). It has demonstrated the presence of antibodiesdirected against the second extracellular loop β1 adrenergic receptor in serum of patientswith Ech. The standarization of testing is necessary to ensure obtaining reliable resultsand comparative, the objective study was performed to standarize the test (ELISA) for thedetection of anti-β1 adrenergic antibodies in patients with Ech,were determined optimalconcentrations of antigen (30μg/ml, 50μg/ml y 70 μg/ml),optimal dilution of sera(1/20, 1/50,1/60) and the optimal conjugate title (anti - human IgG, coupled to alkaline phosphatase) in96-well plates with serums of high, medium and low reactivity. To discriminate positivesera from negative the cutoff was determined. It was selected as the optimal concentration ofantigen50μg/mldilutions of serum 1/50 and conjugate1/500the cut that was set at D.O 0,278nm. The conditions evaluated for standardized testing, were appropriate for the detection ofanti-β1 adrenergic antibodies in patients with Chagas disease.