Variation in sister chromatid exchange frequencies and cell-cycle kinetics between human whole blood and plasma leukocyte cultures

Os efeitos da concentracao de bromodeoxiuridine (BUdR) e o comprimento do periodo de sintese (S) na frequencia basal de intercâmbios de cromatides irmas (SCEs)e na taxa de proliferacao de culturas de sangue total (WBC) e de leucocitos plasmaticos (PLC) humanos foram estudados. Um metodo imunofluorescente foi usado para induzir a diferenciacao de cromatides irmas. Este metodo emprega uma baixa concentracao de BUdR para a marcacao de cromossomos durante o primeiro ciclo celular in vitro (3,3µM), e o anticorpo monoclonal anti-BUdR conjugado com fluoresceina isotiocianada (FITC) para deteccao. Permitiu-se que WBC e PLC crescessem durante o primeiro ciclo celular (48h) na presenca de BUdR; o meio de cultura foi entao substituido pelo meio de cultura sem BUdR e as celulas foram cultivadas por um ciclo celular adicional (24h) ate a colheita (72h). Os cromossomos foram contrastados com iodeto de propidium DAPI. PLC mostrou no minimo um aumento em dobro na frequencia de SCE sobre os valores de WBC e a paralela, independente da concentracao de BUdR no meio de cultura, pelo menos na faixa do analogo de base empregada (3,3µM-33,0µM). Alem disso, uma estimativa do comprimento do periodo S, feita pela analise da proporcao de diferentes tempos de colheira, revelou que PLC tem um periodo S marcadamente extenso, comparado a WBC. Consequentemente, a taxa de deslocamento de fork do DNA de linfocitos em PLC poderia ser mais lenta que em WBC, resultando em um aumento na frequencia de SCE destas culturas.