A Rapid and Simple Method for Preparation of Adenovirus and for Restriction Endonuclease Cleavage Studies

1981年Suzuki等提出由腺病毒感染細胞抽取病毒DNA之簡單實用的方法。抽取物儘管有細胞DNA的存在，仍無礙於病毒限制酶分割圖譜之分析。因該法所需的時間較長(超過十小時)操作上較繁複，吾人乃將其加以改良，期能改善上述的困擾。改良法是將已感染病毒的細胞以1% SDS及proteinase K(50 mg/ml)處理，置65℃ 1至1.5小時或隔夜之後，以緩衝液飽和的石炭酸一氯仿一異戊醇(25：24：1)抽取DNA兩次，再以RNase(10 mg/ml)在65℃處理30-40分鐘，再抽一次DNA後以冷酒精將DNA沈澱下來，經真空乾燥後溶於緩衝液中即可用來進行分析。本文乃將下列三種方法加以比較。方法(一)：本文改良Suzuki等氏法之改良法。方法(二)：由純化的病毒抽取 DNA。方法(三)：Suzuki 等氏法。將三種方法抽得的DNA以HindⅢ限制酶與之作用後，經電泳分析，照相後比較其限制酶分割圖譜發現三種方法的結果都可作為圖譜之分析，但改良法的優點有四：(1)可省一半以上的工作時間(由十小時減為四小時)。(2)品質和Suzuki法一樣且兩者之產量是方法(二)的四倍以上。(3)RNase, proteinase K 等酵素的用量至少可節省一半。(4)操作上更簡單。因此本改良法適於大量檢體之分子流行病學研究。