Système tampon complet pour la renaturation de la pro-insuline humaine ou de dérivés de pro-insuline humaine

L'invention concerne un procede ameliore de traitement et de purification pour la production de pro-insuline ou de derives de celle-ci en partant de la solubilisation de corps d'inclusion isoles a partir d'un systeme d'expression procaryote, tel qu' E. coli , l'ensemble des etapes de traitement (a savoir, repliement, precipitation, concentration) et de purification etant mises en œuvre dans le meme systeme tampon aqueux comprenant une substance amphotere organique contenant au moins deux groupes fonctionnels, qui contiennent au moins un groupe amino et un groupe acide carboxylique, et qui est caracterise par une difference dans les valeurs de pKa de ses au moins un groupe amino et au moins un groupe acide carboxylique d'au moins 7. De plus, la substance amphotere organique est un agent d'epuration de cyanate efficace, empechant ainsi une carbamylation irreversible d'amines primaires presentes dans la pro-insuline ou dans les derives de celle-ci, laquelle a ete observee en presence de concentrations elevees d'uree. Par consequent, l'inconvenient associe a cet agent auxiliaire chaotropique largement repandu est aneanti, permettant l'utilisation de techniques de chromatographie efficaces et non compliquees pour des etapes de purification faisant suite a la solubilisation et au repliement. L'utilisation d'une substance tampon efficace dans l'ensemble des etapes de traitement de la solubilisation des corps d'inclusion jusqu'au precurseur replie concentre et purifie de l'insuline ou d'un derive de celle-ci, qui en meme temps agit comme agent empechant la modification de proteines par carbamylation, supprimant ainsi le besoin d'ajouter un compose supplementaire ayant une activite d'epuration, conduit a des avantages significatifs concernant le rendement et l'efficacite de la procedure compare aux procedes de production utilises precedemment.