人凋亡相关新基因PNAS-4的克隆、原核表达与纯化

目的克隆人的凋亡相关新基因PNAS-4到原核表达载体,表达并纯化人的PNAS-4蛋白。方法用RT-PCR的方法从人肺腺癌A549细胞中扩增出人的PNAS-4基因。将其克隆到pGEX-6P-1载体,转化到大肠杆菌BL21。用IPTG诱导表达,并用亲和层析的方法纯化出人的PNAS-4蛋白;然后使用质谱分析鉴定纯化后的蛋白质。结果扩增出的人PNAS-4基因与GenBank上的序列完全一致。纯化的人PNAS-4融合蛋白在相对分子质量约50×10^3处可见特异性条带;经质谱鉴定证实所纯化的蛋白质为PNAS-4融合蛋白。结论成功表达和纯化了人PNAS-4蛋白,为今后对人PNAS-4基因的功能研究打下基础。