NK细胞胞浆内游离Ca^2＋浓度和分布的测定

目的:确定NK细胞胞浆内Ca2+的浓度及分布的检测方法.方法:应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察人外周血中NK细胞胞浆内Ca2+的分布,并用Fluo-3/AM和PluromicF-127对胞浆内游离Ca2+的浓度进行测定.结果:最佳负载条件是用2μmol/ml的Fluo-3/AM在37℃恒温下孵育60分钟,同时加入1μl/ml25%的Pluronic F-127以阻断Ca2+荧光示踪Fluo-3/AM的外排和房室化.静息状态下NK细胞胞浆内Ca2+分布不均衡,Ca2+浓度为91.3±4.8nM(-x±s).结论:应用Fluo-3AM和PluronicF-127结合CLSM技术是研究NK细胞胞浆内游离Ca2+的准确,简单,灵敏的方法之一.