Análise dos genes pvpA e mgc2 para caracterização de cepas de Mycoplasma gallisepticum

Mycoplasma gallisepticum (MG) e um importante patogeno relacionado com doencas respiratorias em diversas especies como galinhas, perus, codornas, faisoes e pavoes. A presenca de MG pode levar a diminuicao da producao e qualidade de ovos, ma eclodibilidade, queda na eficiencia alimentar, alem de altas taxas de mortalidade e condenacao de carcacas. Em galinhas poedeiras e liberado a utilizacao de vacinas vivas atenuadas, e a diferenciacao molecular de cepas vacinais das cepas de campo de MG pode ser util na deteccao de infeccoes bem como na definicao de estrategias de intervencao. Visando desenvolver uma tecnica para diferenciacao das cepas vacinais, este projeto consistiu na caracterizacao molecular de cepas de MG em lotes de distintas regioes do pais, baseados no sequenciamento de 2 antigenos de superficie (pvpA e mgc2). Primeiramente, preparou-se um banco de genes com amostras de cepas de referencia (S6, R, A5969, HF-51 K503, K703 e K730) e cepas vacinais (F, ts-11 e 6/85) para estes alvos. Laboratorialmente foram analisadas a cepa MG70 (cepa vacinal, obtida a partir de galinhas provenientes de plantel assintomatico do Brasil) alem de amostras clinicas provenientes de 13 lotes comerciais das regioes Centro Oeste, Nordeste, Sul e Sudeste. Realizou-se a extracao de DNA (traqueias e swabs traqueais – 3 a 20 amostras por lote) e deteccao de MG por PCR em tempo real.  Posteriormente, as amostras MG positivas foram submetidas para amplificacao de alvos pvpA e mgc2 e os amplicons sequenciados no equipamento ABI 3130xl. As sequencias foram comparadas no programa Mega 5.0 (2000 bootstrap). Os 2 genes analisados neste trabalho confirmaram-se altamente polimorficos com alta capacidade de diferenciacao de MG (58 – 100% e 82-100% similaridade respectivamente para o gene pvpA e mgc2).  A cepa vacinal MG70 pode ser diferenciada das cepas de referencia, das demais cepas vacinais e tambem de todas as amostras clinicas avaliadas. Duas amostras de campo da regiao Nordeste (6032 - Ceara e 1877 -Alagoas) apresentaram 100% de similaridade com a cepa vacinal F, e uma amostra da regiao Sudeste (1274 – Minas Gerais) apresentou 100% de similaridade com a cepa vacinal ts-11. Alem disto, as cepas 2841 e 2834 (ambas da regiao Sul) apresentaram 100% de similaridade entre si, apesar de serem de lotes distintos. As demais amostras demonstraram-se distintas das cepas de referencias e vacinais, confirmando que estes genes de antigenos de superficie sao bons alvos para diferenciacao de MG.