Estudios sobre la producción de un Interferón recombinante alfa humano expresado bajo el control del promotor lac UV5 de Escherichia coli

La insercion de un oligonucleotido de 18 pares de bases en el sitio Pvull, ubicado en la region que codifica para el prepeptido del gen de IFN * 2 humano, resulto en un notable incremento en la actividad antiviral producida en E. coli bajo el control de los promotores lac UV5 situado en un plasmido recombinante. El maximo de actividad antiviral especifica, cuando se utilizo E. coli HB 101 como celula hospedadora, se produjo en la mitad de la fase exponencial, despues de lo cual se observo una marcada caida. Cuando se utilizo E. coli JM 101, que solo permite la sintesis del antiviral en presencia del inductor (IPTG), el maximo se observo una hora y media despues de agregado este inductor, cualquiera fuere el punto de la curva de crecimiento. El contenido plasmidico por celula durante el ciclo de crecimiento se mantuvo constante. Cuando se amplifico el numero de copias del plasmido por pretratamiento de las bacterias con cloranfenicol, se amplifico la capacidad de sintesis en los puntos iniciales de la curva de crecimiento. La vida media del antiviral en extractos bacterianos crudos fue de 75 minutos a 37-C y 165 minutos a 30-C. La disminucion de la temperatura de cultivo de 37-C a 34-C durante la produccion, aumento la velocidad inicial de acumulacion del producto, pero el maximo alcanzado en la actividad especifica del antiviral no vario