Desarrollo de modelos cinéticos en dos y tres estados excitados, aplicables al intercambio protónico en disolución acuosa de 2', 7' -difluorofluoresceína y su resolución mediante análisis global compartimental

La fluoresceina es uno de los fluoroforos mas conocidos y empleados en multitud de aplicaciones en diversos campos de la ciencia, destacando su amplia utilizacion en bioquimica. Sin embargo, presenta una seire de desventajas que limitan su uso, como por ejemplo, la perdida de fluorescencia por fotoblanqueamiento o una alta dependencia de su emision de fluorescencia con el pH, en un intervalode pH cercano al fisiologico. Por ello, en la actualidad se estan sintetizando un gran numero de nuevos colorantes que mejoran ciertas caracteristicas de la fluoresceina. Uno de estos fluoroforos es el derivado bifluorado, 2', 7' -difluorofluoresceina, el cual se ha popularizado rapidamente, encontrando muchas aplicaciones en bioquimica, genetica, neurologia, etc. Ya que la bibliografia cientifica sobre este nuevo fluororforo es muy escasa, en esta Tesis Doctoral se ha investigado las propiedades espectrales de absorcion y emision de las cuatro especies prototropicas, y sus correspondientes tautomeros, existentes en disolucion acuosa, cuantificandose sus constantes de equilibrio, tanto en el estado fundamental como en el excitado. Para esto ultimo, se han propuesto los modelos cineticos que describen adecuadamente las reacciones de transferencia protonica en el estado excitado que se presentan en la 2', 7' -difluorofluoresceina. Para obtener las constantes de velocidad de todas las reacciones propuestas en el modelo se ha empleado la potente herramienta del analisis global compartimental de las superficies de decaimientos de emision de fluorescencia con resolucion temporal. Dos sistemas compartimentales se resuelven para este fluoroforo. Es uno de ellos, se soluciona la cinetica de la reaccion de transferencia protonica en estado excitado, entre las especies monoanionica y dianionica, facilitada por las especies del tampon acido acetico/acetato. Este aceptor/dador protonico se considera un compuesto modelo