Normalización de una técnica de inmunoensayo(Elisa indirecto) para el pesquisaje de anticuerpos monoclonales

Se desarrollo un metodo de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de raton contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalizacion del sistema se evaluaron la concentracion de antigeno adsorbida a la fase solida, la solucion tampon diluyente de las muestras, las disoluciones optimas para cada tipo de muestras y el periodo de incubacion de estos. Se determino que una concentracion de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solucion tampon de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05% y albumina bovina serica al 1,5%, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubacion de 18 h a 4-C, ofrecian los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variacion interplacas intraplaca por debajo del 5% para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos