hTERT—TK／GCV联合hTERT—CD／5-FC靶向抗肝癌及旁观者效应机制的研究

目的观察人端粒酶反转录酶-胸苷激酶／丙氧鸟苷（hTERT—TK／GCV）联合hTERT-胞嘧啶脱氨酣5-氟胞嘧啶（CD／5-FC）对肝癌细胞株HepG2生长及凋亡的靶向杀伤效应。方法细胞培养，构建pGL3-hTERT—CD质粒．hTERT—TK／GCV联合hTERT—CD／5-FC同时转染HepG2细胞和正常肝细胞L—02，用噻唑蓝（M1Tr）法观察药物浓度对肝癌细胞存活率的影响，用DNA缺口末端标记法（TUNEL）观察自杀基因对肝癌细胞生长和凋亡的影响。以及对旁观者效应的观察。结果MTF法显示hTERT启动子驱动下两自杀基因体系可以协同表达于肝癌细胞，当GCV为20μg/ml，5-FC为200μg／ml时，对HepG2细胞的杀伤作用达到最大。TUNEL法显示在肝癌细胞中，自杀基因-被启动子高效表达，产生凋亡小体和明显的细胞凋亡率，转染正常肝细胞无此现象。结论hTERT-TK／GCV联合hTERT—CD／5-FC基因体系能够靶向杀伤肝癌细胞，存在明显的旁观者效应，弥补了基因治疗转染效率不高的问题，便于指导今后的实验和研究。