不同启动子指导的HSV1-sr39TK／GCV系统对小鼠淋巴细胞的敏感性研究

目的观察慢病毒载体中不同启动子指导的突变型单纯疱疹病毒1型胸苷激酶（HSV1-sr9TK）基因在小鼠T淋巴细胞内的表达差异，并进一步比较对丙氧鸟苷（ganciclovir，GCV）的敏感性。方法用亚克隆技术将PCR扩增的HSV1-sr9TK基因分别连接至慢病毒载体不同启动子后，然后在HSV1-sr9TK基因后以内部核糖体进入位点（internal ribosome entry sites，IRES）连接绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）报告基因；采用三质粒包装系统包装病毒，将病毒感染刀豆蛋白A（concanavalin，ConA）激活的小鼠淋巴细胞，分别用流式细胞术、RT—PCR法鉴定HSV1-sr9TK和GFP基因在小鼠淋巴细胞的表达，用Cell Counting Kit-8（CCK-8）法观察感染不同病毒的淋巴细胞对前体药物GCV的敏感性。结果不同启动子指导的HSV1-sr9TK及GFP基因均可在小鼠淋巴细胞表达，巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）启动子驱动表达能力最强，磷酸甘油激酶（phosphoglycerokinase，PGK）启动子最弱。感染含CMV启动子病毒的淋巴细胞对GCV的IC50值最小。结论在小鼠淋巴细胞内CMV启动子驱动的慢病毒载体HSV1-sr9TK基因表达最强，对前体药物GCV敏感性最高。