Technique d’immunofluorescence et FISH combinées sur tissu fixé en formol et inclus en paraffine : application au lymphome de Hodgkin

Introduction/objectifs Le lymphome de Hodgkin classique (LHc) presente une histologie particuliere caracterisee par peu de cellules tumorales CD30+ [1] . Le LHc exploite la voie PD1/PDL1 via une alteration du nombre de copie du gene CD274/PDL1 (9p24,1) codant pour PDL1 et represente donc un excellent candidat aux therapies anti-PD1 [2] , [3] . L’amplification CD274/PDL1 pourrait avoir un role pronostique [4] . L’objectif est de developper une technique d’immunofluorescence-FISH combinee CD30/PDL1 pour reperer les cellules tumorales et ainsi ameliorer la detection des anomalies cytogenetiques de CD274/PDL1. Materiels/Patients et methodes L’immunofluorescence-FISH est realisee sur prelevements fixes en formol et inclus en paraffine. Apres deparaffinage, le demasquage antigenique est realise dans un tampon pH6 a 99 °C. L’anticorps primaire et l’anticorps secondaire fluorescent rouge sont incubes sequentiellement pendant 1 h. La sonde « maison » PDL1 est ensuite appliquee. Le lavage post-hybridation est realise dans du PBS/0,1 % Tween20. Deux cas sont analyses et 50 cellules tumorales sont comptees a l’aide d’un microscope a epifluorescence. Resultats On observe la presence d’anomalies recurrentes et heterogenes du gene CD274 / PDL1  dans les cellules tumorales marquees par l’anticorps fluorescent rouge anti-CD30. Le premier cas montre 68 % de cellules presentant un « gain » PDL1, 22 % une « amplification », 6 % une polysomie du chromosome 9 et 2 % sans anomalie. Le second patient montre 64 % de cellules tumorales avec une « amplification » PDL1, 30 % avec un « gain » et 6 % sans anomalie. Par rapport a une FISH classique, Il faut 3 h supplementaires de technique correspondant a l’etape d’immunofluorescence CD30. Le temps d’analyse est d’environ 1 h. Conclusions Cette technique est realisable dans la plupart des laboratoires. Elle est applicable a tout les cancers impliquant la voie PD1/PDL1 [5] . Cependant, son interpretation demande un temps d’analyse consequent, plus adapte a de la recherche. Des etudes sur de plus grandes series de patients sont necessaires pour juger de son utilite.