Properties of Flavobacterium odoratum KU Isoamylase

Isoamylase was purified from the culture filtrate of Flavobacterium odoratum KU to a single protein by starch adsorption and gel-permeation chromatography on a Toyopearl HW-55S column. The molecular weight and isoelectric point of the enzyme were found to be 78000 and 8.7, respectively. The enzyme was stabilized and stimulated by Ca2+. Its optimum temperatures for activity were 50 and 45°C in the presence and absence of CaCl2 (1mM), respectively, and the optimum pH was 6.0 in the presence of CaCl2 (1mM). The enzyme debranched amylopectin and glycogen completely. The Km and It values of the enzyme for amylopectins and glycogens were similar but were slightly lower than the values for the β-limit dextrins of these polysaccharides. The k0 values for the β-limit dextrins of potato amylopectin and rabbit liver glycogen were slightly lower and higher than those of the mother polysaccharides, respectively. Pullulan was practically not hydrolyzed. Flavobacterium isoamylase did not hydrolyze (16)-α-D-glucosylcyclodextrins (CDs), and it debranched branched CDs having longer (14)-α-glucan side chains than maltotriosyl residues, and maltosyl CDs with difficulty. The enzyme practically did not hydrolyze raw starches but it enhanced the raw-starch digestion of glucoamylases synergistically. Die Eigenschaften von Flavobacterium odoratum KU isoamylase. Aus dem Kulturfiltrat von Flavobacterium odoratum KU wurde die Isoamylase zu einem Einzelprotein durch Starkeadsorption und Gel-Permeationschromatographie auf einer Toxopearl-HW-55S-Saule gereinigt. Das Molekulargewicht und der isoelektrische Punkt des Enzyms wurde mit 78000, bzw. 8,7 festgestellt. Das Enzym wurde stabilisiert und durch Ca2+ stimuliert. Seine optimalen Temperaturen fur die Aktivitat betrugen 50 und 45°C in Gegenwart und Abwesenheit von CaCl2 (1mM), und der optimale pH-Wert betrug 6,0 in Gegenwart von Cacl2 (1mM). Das Enzym entzweigt Amylopektin und Glycogen vollstanding. Die Km- und k0-Werte des Enzyms fur Amylopectine und Glykogene waren ahnlich aber wenig geringer als die Werte fur β-Grenzdextrine fur diese Polysaccharid. Die It-Werte fur die β-Grenzdextrine von Kartoffel-Amylopektin und Kaninchen-Leberglykogen waren etwas niedriger, aber hoher als diejenigen der anderen Mutterpolysaccharide. Pullulan wurde praktisch nicht hydrolysiert. Flavobacterium-isoamylase hydrolisierte nicht (16)-α-D-Glucosyldextrine (CDs), jedoch entzweige verzweigte CDs mit langeren (1,4)-α-Glucan-Seitenketten als Maltotriosylreste und Maltosyl-CDs unter Schwierigkeiten. Das Enzym hydrolysierte praktisch keine Rohstarken, jedoch steigerte es synergistisch den Rohstarkeabbau durch Glucoamylasen.