Traducción independiente de la estructura 5´cap del ARN genómico del virus dengue

Objetivos. Analizar la participacion de la caperuza metil-guanosin-trifosfato (5´cap) y de la region inicial del ARN genomico del virus dengue serotipo 2 (DENV-2) genotipo Americano en la traduccion, utilizando un sistema libre de celulas obtenido de placenta humana. Materiales y metodos. Se preparo el plasmido recombinante pTZ18R-D2 conteniendo el ADN que codifica la 5´UTR y los primeros 201 nucleotidos de la capside viral. Este plasmido se utilizo para transcribir el ARN correspondiente (ARN-D2), sin la 5´cap. El ARN-D2 fue traducido en un sistema constituido por la fraccion posmitocondrial (S-30) de placenta humana y se evaluo la incorporacion de [ 14C] aminoacidos en presencia del ARN-D2 y en su ausencia (control). Se disenaron siete oligonucleotidos antisentido (OAs1-7) dirigidos contra secuencias de las estructuras SLA, SLB y cHP del ARN-D2 y se analizo el efecto de los mismos sobre la traduccion ARN-D2. Resultados. El ARN-D2 produjo un incremento significativo (p<0,001) en la incorporacion de [14C] aminoacidos, con estimulacion del 75% de la actividad traduccional respecto al control. El analisis de los productos de traduccion mostro un pico de incorporacion correspondiente a peptidos con peso molecular aparente cercano al esperado (7,746 kDa). El OAs5, complementario a una secuencia de la estructura SLB del ARN-D2, inhibio completamente la traduccion. Conclusiones. El ARN-D2 fue traducido de manera especifica y eficiente, bajo condiciones semejantes a las intracelulares en humanos, por un mecanismo alternativo independiente de la 5´cap, que involucraria a la estructura SLB. Este mecanismo podria considerarse como blanco en el desarrollo de terapias antisentido para inhibir la reproduccion del virus.