Estudo in vitro de potenciais biomarcadores de nefrotoxicidade por expressão gênica diferencial usando gentamicina

A nefrotoxicidade induzida por drogas e um dos efeitos mais frequentemente observados em farmacoterapias a longo prazo e na fase pre-clinica de desenvolvimento de drogas. O desenvolvimento de moleculas bioativas mais especificas para uso terapeutico tem sido dificultado devido a incidencia de reacoes adversas. Os efeitos da nefrotoxicidade sao tardiamente descobertos devido a falta de sensibilidade dos metodos in vivo para avaliacao desse efeito. Por esse motivo, tem-se buscado o desenvolvimento de metodos alternativos in vitro para a identificacao precoce de toxicidade. A identificacao de alteracoes geneticas induzidas por drogas e de essencial importância para a elucidacao de mecanismos moleculares e deteccao de dano renal. A gentamicina, por exemplo, e um antibiotico aminoglicosidico amplamente utilizado que provoca nefrotoxicidade. No presente estudo, celulas LLC-PK1 foram expostas por 24 h a concentracoes de gentamicina de 4 (baixa), 8 (media) e 12 (alta) mM, de acordo com o teste MTT, para avaliacao da expressao genica diferencial. Uma presquisa bibliografica foi realizada para identificar genes associados ao desenvolvimento de nefrotoxicidade. Um grupo de genes foi selecionado baseado-se na alteracoes da expressao genica em varios estudos de nefrotoxicidade. Devido a escassa base de estudo para o modelo celular em estudo, a busca pelas sequencias de mRNAs codificadores das proteinas previamente associadas aos dano renal foi realizada nos bancos de dados do National Center for Biotechnology Information NCBI (USA). Os iniciadores foram obtidos utilizando o programa Primer BLAST (NCBI), baseado nas sequencias dos transcritos escolhidos. O RNA total foi extraido das celulas, e RT-PCR foi usado para avaliar os perfis de expressao dos genes selecionados. Entre os genes analisados, quarto deles demonstraram ser diferencialmente induzidos em celulas expostas ao nefrotoxicante: HAVcr-1 (virus da hepatite A receptor celular 1), CASP3 (caspase 3), ICAM-1 (molecula de adesao intracelular 1) e EXOC3 (complexo exocitico componente 3). De acordo com os resultados obtidos, pode-se sugerir que esses genes podem ser utilizados como precoces biomarcadores in vitro para a identificacao de nefrotoxicidade. O estabelecimento de marcadores genomicos e uma ferramenta promissora na avaliacao de nefrotoxicidade e serao uteis no desenvolvimento de drogas mais seguras.